液相色譜柱是液相色譜分析系統(tǒng)的核心部件，實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)不準(zhǔn)，很多時(shí)候就看它用得對(duì)、護(hù)得好與否。做好正確使用和日常維護(hù)，才能讓每一次分析數(shù)據(jù)都靠譜。

一、色譜柱使用說(shuō)明

使用前注意

新色譜柱里的儲(chǔ)存液，一般是出廠評(píng)價(jià)報(bào)告上指定的流動(dòng)相。用之前先確認(rèn)下，這儲(chǔ)存液和你要用到的樣品流動(dòng)相能不能混溶，別直接混用出問(wèn)題。要是反相色譜里，你用的洗脫劑是高濃度鹽或者緩沖液，記得先換成 10% 低濃度有機(jī)相洗脫劑過(guò)渡下，這樣能避免鹽析堵了柱子。

流動(dòng)相要求

配流動(dòng)相建議用色譜純的有機(jī)溶劑和超純水，要是流動(dòng)相里含鹽，好過(guò)一下 0.45μm 的濾膜。流動(dòng)相的容器和在線過(guò)濾器也得定期清洗，別讓雜質(zhì)堆積。常規(guī)的硅膠基質(zhì)鍵合相填料，適合在 pH 2.0-8.0 的環(huán)境用；要是分析堿性化合物，選 BDS C18 填料更合適，它能耐受 pH 2.0-10.0 的范圍。不過(guò)要是在 pH 臨界值附近用了柱子，用完得趕緊用合適的溶劑清洗干凈。

樣品處理

樣品得提前預(yù)處理，保證干凈才行，比如用樣品過(guò)濾器或者預(yù)處理柱（SPE）處理下。遇到難處理的樣品，加個(gè)保護(hù)柱能少不少麻煩。另外，做正相色譜分析時(shí)，所有溶劑和樣品都得嚴(yán)格脫水，不然會(huì)影響分析結(jié)果。

表 1：色譜柱使用關(guān)鍵要點(diǎn)

二、色譜柱保存方法

日常保養(yǎng)

每次用了緩沖液或者含鹽的流動(dòng)相后，先拿 10% 甲醇 / 水沖洗柱子 30 分鐘，把鹽分沖掉，之后再用純甲醇沖洗 30 分鐘。這里要注意，別用純水直接沖，容易讓填料塌陷，反而損壞柱子。

長(zhǎng)期保存

不同類型的柱子，保存方式不一樣：反相柱要泡在純甲醇或者乙腈里；正相柱得放在脫水的純正己烷中；離子交換柱則保存于含疊氮化鈉的水溶液里。保存時(shí)記得把柱子原裝的堵頭堵好，放在室溫環(huán)境下就行。

表 2：色譜柱保存規(guī)范

三、色譜柱再生處理

反相柱再生

按順序用 20-30 倍柱體積的溶劑沖洗：先沖甲醇：水 = 10:90（V/V），再?zèng)_乙腈，接著沖異丙醇，后反過(guò)來(lái)按異丙醇、乙腈、甲醇：水的順序再?zèng)_一遍。

正相柱再生

同樣用 20-30 倍柱體積的溶劑依次沖洗：先正己烷，再異丙醇、二氯甲烷，后甲醇，之后反過(guò)來(lái)按甲醇、二氯甲烷、異丙醇、正己烷的順序再?zèng)_。特別提醒，所有用到的溶劑都必須嚴(yán)格脫水，一點(diǎn)水分都不能有。

表 3：色譜柱再生流程

四、常見(jiàn)問(wèn)題與解決方案

柱壓異常升高

遇到柱壓莫名升高，大概率是這幾個(gè)原因，對(duì)應(yīng)處理就行：

篩板堵塞：要么反沖色譜柱，要么把柱頭拆下來(lái)超聲清洗 —— 用 10% 稀硝酸超聲 10 分鐘，之后再用純水超聲 10 分鐘。

填料污染：把柱頭前端被污染的填料換掉就行。

鹽結(jié)晶：先用 10% 甲醇 / 水沖洗，把結(jié)晶溶解掉，之后再換高濃度甲醇繼續(xù)沖。

pH 不當(dāng)：要是因?yàn)?pH 不合適導(dǎo)致固定相結(jié)構(gòu)受損，這種情況通常很難恢復(fù)，只能平時(shí)多注意 pH 范圍。

表 4：柱壓異常升高問(wèn)題處理

其實(shí)只要用對(duì)方法、做好維護(hù)，不僅能延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，更能讓每一次分析結(jié)果都穩(wěn)定準(zhǔn)確，少走不少實(shí)驗(yàn)彎路。