做液相色譜分析時(shí)，讓人頭疼的莫過(guò)于儀器突然 “鬧脾氣”—— 壓力莫名飆升、峰形變得亂七八糟、保留時(shí)間忽前忽后…… 遇到這些情況，十有八九是色譜柱堵了。別慌，掌握一套實(shí)用的排查和疏通方法，就能讓您的色譜柱 “起死回生”，還能延長(zhǎng)它的使用壽命，幫實(shí)驗(yàn)室省下不少成本。

一、先判斷：色譜柱是不是真堵了？

要解決問(wèn)題，先得確認(rèn)問(wèn)題。當(dāng)液相色譜儀出現(xiàn)這些 “異常信號(hào)” 時(shí)，您就得警惕色譜柱可能堵了：

壓力異常升高：這是明顯的信號(hào)。系統(tǒng)壓力比方法剛建立時(shí)高了不少，或者在短時(shí)間內(nèi)一個(gè)勁地往上竄。

峰形異常：色譜峰變得不規(guī)整，出現(xiàn)分叉、拖尾、前沿的情況，峰面積也明顯變小，分離效果大不如前。

保留時(shí)間漂移：目標(biāo)化合物的保留時(shí)間不穩(wěn)定，變化很明顯。

壓力波動(dòng)劇烈：就算不進(jìn)樣，系統(tǒng)壓力也忽高忽低，很不穩(wěn)定。

二、再定位：堵的是柱子還是其他地方？

發(fā)現(xiàn)壓力高，可別一股腦兒就怪色譜柱，系統(tǒng)其他地方也可能出問(wèn)題。用一個(gè)簡(jiǎn)單的 “斷開法” 就能找到問(wèn)題所在：

斷開色譜柱：把色譜柱從流路里取下來(lái)，用兩通或者短路接頭把泵和檢測(cè)器連起來(lái)。

運(yùn)行方法：按照相同的流速?zèng)_洗系統(tǒng)。

觀察壓力：

如果壓力還是很高，說(shuō)明堵塞的地方在色譜柱之前，可能是過(guò)濾頭、保護(hù)柱、在線過(guò)濾器或者管路，得一個(gè)個(gè)排查清洗或更換。

如果壓力恢復(fù)正常，那問(wèn)題大概率出在色譜柱本身或者保護(hù)柱上。這時(shí)候可以先試試更換或卸下保護(hù)柱再測(cè)試，要是壓力正常，就是保護(hù)柱臟了；要是壓力還是高，那就是色譜柱堵了。

三、實(shí)戰(zhàn)疏通：四步搞定色譜柱堵塞

確定是色譜柱堵塞后，清洗要遵循 “從溫和到強(qiáng)力” 的原則，千萬(wàn)別一開始就用強(qiáng)溶劑和高流速，不然可能會(huì)對(duì)柱子造成二次傷害。

第一步：反向沖洗（常用也有效）

大部分色譜柱是允許反沖的（但一定要看說(shuō)明書確認(rèn)）。把色譜柱的入口和出口調(diào)換連接，用合適的流動(dòng)相反向沖洗，能把堵在柱頭的顆粒污染物沖出來(lái)。

注意：有些特殊鍵合相的柱子，比如某些糖分析柱，不建議反沖，操作前一定要查閱說(shuō)明書。

第二步：梯度清洗（針對(duì)強(qiáng)保留污染物）

根據(jù)污染物的性質(zhì)，比如脂類、蛋白質(zhì)、疏水性強(qiáng)的物質(zhì)等，選擇不同的清洗溶劑序列。清洗前一定要確保所用溶劑和當(dāng)前流動(dòng)相互溶，防止鹽析出來(lái)！

推薦一個(gè)清洗流程：

先用純水（或 95% 水 + 5% 有機(jī)相）以 0.2-0.5 mL/min 的低速?zèng)_洗 30 倍柱體積，把緩沖鹽去掉。

再用強(qiáng)溶劑（如乙腈或甲醇）低速?zèng)_洗 30 倍柱體積。

針對(duì)有機(jī)污染物：按照乙腈→異丙醇→二氯甲烷（或氯仿，要確認(rèn)柱子是否兼容）→異丙醇→乙腈的順序，每種溶劑低速?zèng)_洗 20-30 倍柱體積。

針對(duì)蛋白質(zhì) / 生物樣品：可以用 0.1% TFA 水溶液→乙腈→異丙醇的序列清洗。

后用初始流動(dòng)相平衡色譜柱。

第三步：更換篩板 / 再生

如果清洗后效果不好，可能是柱頭篩板堵得太嚴(yán)重了。有經(jīng)驗(yàn)的用戶可以在廠家指導(dǎo)下試試更換柱頭篩板，但這有一定風(fēng)險(xiǎn)，可能會(huì)破壞柱床。要是柱子很貴重，也可以聯(lián)系廠家進(jìn)行專業(yè)的再生維護(hù)。

第四步：后的嘗試

如果所有方法都沒用，而且柱子過(guò)了保修期、價(jià)值不高，那可以試試卸下柱頭，用軟布蘸著溶劑輕輕擦頂端篩板，或者用極細(xì)的針頭輕輕疏通。這個(gè)操作風(fēng)險(xiǎn)很高，會(huì)影響色譜柱的柱效，且易損壞柱子，只能作為后的嘗試，有點(diǎn)死馬當(dāng)活馬醫(yī)的意思。

四、日常維護(hù)：預(yù)防堵塞更重要

其實(shí)，90% 的堵塞問(wèn)題都能通過(guò)良好的操作習(xí)慣來(lái)避免，做好日常維護(hù)比出了問(wèn)題再解決要省事得多：

一定要用保護(hù)柱：保護(hù)柱就像色譜柱的 “金鐘罩”，能有效攔住顆粒物和強(qiáng)保留物質(zhì)，性價(jià)比很高。

做好樣品前處理：樣品必須用 0.22 μm 或 0.45 μm 的濾膜過(guò)濾，把微小顆粒徹底去掉。

妥善處理流動(dòng)相：所有流動(dòng)相，特別是水相和緩沖鹽，必須用高純?cè)噭?，還要經(jīng)過(guò)抽濾脫氣。緩沖液好現(xiàn)配現(xiàn)用，防止長(zhǎng)菌。

用合適的過(guò)渡方式替換流動(dòng)相：方法結(jié)束后，如果用了緩沖鹽，必須先用高比例水相（>10%）沖洗至少 30 分鐘，把鹽分徹底沖干凈，再過(guò)渡到有機(jī)相保存，絕對(duì)不能把色譜柱長(zhǎng)時(shí)間放在緩沖鹽溶液里。

操作要溫柔：避免流速和壓力劇烈變化，遵守色譜柱的 pH 和壓力限值。

色譜柱是HPLC方法的“心臟”，重要且價(jià)格不菲。掌握正確的堵塞處理和日常維護(hù)方法，不僅能幫您節(jié)省寶貴的實(shí)驗(yàn)時(shí)間和維修成本，還能保證分析數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確可靠。下次再遇到壓力飆升的情況，相信您一定能從容應(yīng)對(duì)，讓您的色譜儀很快恢復(fù)高效工作狀態(tài)！